3.2 El objetivo final.

El objetivo final del proyecto es el desarrollo de una microbioterapia o terapia basada en la  administración de mezclas concretas de bacterias provenientes de la microbiota intestinal sana y con  propiedades autotolerogénicas, para el bloqueo efectivo del proceso autoinmunitario responsable de la destrucción de las células beta pancreáticas en humanos. 

Después de la identificación de las bacterias  autotolerogénicas y del estudio preclínico de los cócteles microbianos en la incidencia de Dt1 del modelo animal NOD, se procederá a la fase clínica del proyecto. En ésta, la microbioterapia será administrada a: infantes y adolescentes con predisposición genética, para corregir la posible disbiosis intestinal previa al debut diabético, evitando así la aparición de la respuesta autoinmune. Y a pacientes de nuevo diagnóstico y pacientes diabéticos de larga  evolución, con el objetivo de frenar o reducir progresivamente el grado de severidad de la respuesta  autoinmune. 

3.3 Metodología utilizada.

Los modelos animales son esenciales para el estudio de la dt1, ya que los experimentos in vivo permiten el control de todas aquellas variables, tanto genéticas como ambientales, que puedan estar  involucradas en el desarrollo de la enfermedad, contribuyendo así a la comprensión de su etiopatogenia. Cuando los ratones NOD son mantenidos en un área convencional con un ambiente  microbiológico no restringido, su incidencia de Dt1 disminuye drásticamente hasta su casi total  desaparición. Dicha circunstancia refleja también la importancia del factor microbiológico en la dt1.  

La composición de la microbiota intestinal de las cepas de ratón anteriormente  mencionadas será analizada mediante secuenciación del gen 16S rRNA con la tecnología Illumina  MiSeq, seguida del pertinente análisis bioinformático vía el software QIIME. Una vez identificadas  aquellas comunidades bacterianas asociadas a un estatus de ausencia y/o disminución en la incidencia  de dT1, así como a diferentes perfiles de sistema inmunitario, se efectuará a su aislamiento y cultivo.

A continuación, se administrarán cócteles de bacterias a ratones de la cepa NOD para evaluar el efecto del tratamiento microbiológico sobre su incidencia de diabetes, mediante seguimiento de glucemia y se analizará su sistema inmunitario mediante el inmunofenotipaje de sus limfocitos B y T por citometría de flujo (BD FACS CantoII).